在上一篇文章化学发光磁珠试剂制备工艺（一）中，我们介绍了磁珠包被试剂的工艺，本篇文章我们主要介绍一下酶标记的工艺。这里的酶指的是碱性磷酸酶。

酶标记抗体步骤分为抗体活化、酶活化；抗体、酶连接；封闭，纯化。

（1）抗体活化

取1mg抗体，加入活化剂SMCC（根据蛋白浓度添加不同的量），50ug，旋涡混匀。置于25-30℃反应2小时，或者2-8℃过夜反应。

（2）酶活化

取1mg酶，加入活化剂SH25ug，旋涡混匀。置于25-30℃反应2小时，或者2-8℃过夜反应。

注意：酶活化与抗体活化同步进行。

（3）抗体、酶纯化

抗体、酶活化结束后，用超滤管或者脱盐柱进行纯化。

（4）抗体、酶连接

将抗体和酶以质量比1:1的比例添加，混匀，置于25-30℃反应2小时，或者2-8℃过夜反应。

（5）封闭

抗体、酶连接结束后，在溶液中加入MES-Na进行封闭终止反应。

（6）纯化

封闭结束后，用超滤管或者脱盐柱进行纯化，得到酶标抗体母液。

在实际反应过程中，不同蛋白的偶联需要的活化缓冲液不同，PH也不同，需要根据项目进行优化。

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